一种新型半自动血液推片机的研制(2)

4 测试验证

初次改良后的推片机，经验证，其推制的血涂片效果较为满意。该推片机在多家医疗机构试用的结果均符合预期，其制作出的满意血涂片比例显著高于手工制片（三级医院P＜0.05，一级医院P＜0.01）；三级医院和一级医院检验人员利用手工法制作的血涂片合格率无显著性变化[11]。此后，笔者继续研究其在教学中的辅助应用价值，结果显示，推片机法制作出的合格血涂片比例显著高于手工法（P均＜0.01）；检验、检疫专业学生利用手工法制作的血涂片合格率无显著性变化；手工法联合推片机法制片组既可训练学生手工制片技能，也可为那些没有得到合格血涂片的学生制作满意的标本，增加其观察血片的时间，进一步提高了教学效果[2]。

经过二次改良后，仪器制片过程与之前有较大不同，具体如下：① 插上电源，设置仪器参数；② 安放干燥洁净推玻片；③ 安放干燥洁净载玻片，并在距玻片左侧1.5 cm处（位置1）滴加末梢血或抗凝静脉血一滴（以5～6 μL为宜）；④ 按开始键，载玻片载台上升2 s（载台初始位置较高）后，其上血滴即与从右侧初始位置运动而来的推片接触（接触时间为1 s），然后推片向右运动完成血膜推制，而载台历时0.4 s后开始下降，最后推片和载台回到初始位置；⑤ 迅速取下载玻片并风干，进行染色；⑥ 使用浸有无水酒精的脱脂棉球轻轻将推片上血渍拭去，将滴好血液标本的第二张载玻片放置在载台上，按动开始键后，可进行再次推片。研究发现，改良后制作一张血涂片仅需10 s，大大提高了制片效率，制作出的血涂片不仅美观且形态较为一致（图3），进一步提高镜检和白细胞分类计数的准确性。

图3 推片机第二次改良后制作的血涂片与手工血涂片效果对比注：a～b.仪器制作的血涂片（染色前和染色后）；c.手工制备的血涂片；d.图3b中血涂片放大后的效果。

此外，为了使得制片实用化（厚薄适宜），笔者也初步研究了Hct（正常为0.37～0.49）与推片速度和载台提升回延时间的内在关系。结果显示，对于Hct正常的血液标本，设定3500 Hz左右（3500±500）的推片速度制作出的涂片厚薄适宜；Hct＞0.50的血液标本，设定2500 Hz推片速度制作出的涂片厚薄适宜；而Hct＜0.35的血液标本，设定5000 Hz推片速度制作的涂片满意（图4）。因此，对于不同Hct的血液标本进行推片时，推片机设定的推片速度和载台提升回延时间的建议设置见表1。同时，结果也显示，与手工制作的满意血涂片外观和镜下效果对比，推片机制作的血涂片也显示了较大的优越性，继续保留了血涂片两侧约0.3 cm的空隙，尾部呈羽状（图3～4），且细胞分布更加均匀（图5）。

图4 不同Hct时推片速度的研究注：涂片1和7代表标本1，涂片2和8代表标本2，以此类推。涂片1～6为推片机制作的血涂片（V代表推片速度，单位是Hz）。Hct为0.566、0.51的血液标本，分别采用3000和2700 Hz推片速度时，涂片（涂片1和2）较厚；对于Hct为0.45、0.40的血液标本，分别采用3500和3900 Hz推片速度时，制作出的涂片（涂片3和4）厚薄适宜；Hct为0.352和0.301的血液标本，分别采用4800、4500 Hz推片速度制作的涂片（涂片5和6）较薄。涂片7～12为手工制作的血涂片。涂片7和8偏厚；涂片9～12厚薄适宜。

表1 不同Hct的血液推片时，推片机的推片速度和载台提升回延时间设置的建议注：用血量：6 μL，推片角度：18°，推片停留（移动到延）时间：2 s，启动位置：位置1（前进脉冲5450），前进频率：800 Hz。水平Hct（L/L）推片速度（Hz）载台提升回延时间（s）水平1＜0..3水平20.37～0.水平3＞0..5

图5 二次改良后的推片机和手工制备的血涂片体尾交界处镜下效果比较注：涂片（左，仪器制备）和涂片（右，手工制备）均来源于标本3（Hct=0.45）。a和d为10x；b、c、e和f为100x。

进一步研究发现，通过调整前进脉冲大小（4950）进而改变推片启动位置（位置2，即载玻片中间位置，此时滴加末梢血或抗凝静脉血以1～1.5 μL为宜）（图6），该推片机也能制作出可供疟疾病原学检查使用的满意薄血膜（图7），镜下观察发现，相比于传统手工薄血膜，仪器制作的薄血膜的红细胞单层长度显著增加，对于准确鉴别疟原虫类型有重要意义。

图6 推片启动位置可根据制片目的不同进行设置

图7 人工和推片机制作的薄血膜（方框中）比较注：a.染色；b.未染色。

5 结论

目前，尽管该推片机展现了满意的使用效果，但也存在体积较大、控制相对复杂、不能连续制片等缺点。今后，为了进行推片机在医疗和检测机构的推广应用，笔者将对其进行进一步的改良，拟将从以下方面进行：① 加样定量化：利用DIFF-SAFE型血液分配器[8]，不用拔去抗凝管的橡皮塞便可实现加样定量，不仅安全，而且可大幅降低制片时间；② 制片连续化：在微型电机带动下，通过精密导轨等装置连续装载载玻片；③ 控制简单化：针对低、正常和高Hct的血液标本分别设定相应的推片速度，并通过黄、绿、红三个按钮进行控制；④ 外观人性化：通过使用轻便材料、调整内部构造，进一步减小推片机的重量和体积，并增加手提装置，方便移动。

文章来源：《临床检验杂志》 网址: http://www.lcjyzzzz.cn/qikandaodu/2021/0406/476.html