GB4789-30-2016 单核细胞增生李斯特氏菌检验检验及(2)

注意：穿刺试试尽可能靠近底部，但不要接触底部表面，并避免破坏琼脂。 36℃±1℃孵育24h~48h，在明亮处观察。

6）协同溶血试验cAMP（可选项目）

实验操作：将金黄色葡萄球菌和马红球菌平行接种于血琼脂平板上，挑取纯培养的单个可疑菌落在平行线之间垂直划线并接种。垂直线两端不接触平行线，相距1~2mm，36℃±1℃培养24h~48h。

结果解读：单核细胞增生李斯特菌在金黄色葡萄球菌附近有约2mm的β-溶血增强区，而李斯特菌也出现弱溶血增强区。李斯特菌属马红球菌附近有约5mm~10mm的“箭形”β-溶血增强区，无毒李斯特菌不产生溶血。若效果不明显，则放入4℃冰箱24h~48h后观察。

1) MID67 李斯特菌识别系统

MID67李斯特菌识别系统的优势

MID67溶血试验反应可以代替传统的血平板溶血试验和CAMP

MID67的使用过程？李斯特菌识别系统

最后输入数字码输入MID数据库进行搜索，即可得到识别结果。

2) 单核细胞增生李斯特菌实时荧光PCR快速检测方法

产品：单核细胞增生李斯特菌实时荧光PCR扩增试剂盒

技术原理：基于实时荧光PCR技术，针对检测目标的特定基因片段设计引物和荧光探针，优化反应所需的试剂成分。扩增反应可以通过加入待测样品的核酸进行。在扩增过程中，荧光探针与目的基因片段结合，可被Taq酶分解并产生荧光信号。此时荧光定量PCR仪可以识别出荧光信号，同时根据其强度变化绘制相应的实时扩增曲线，判断是否检测到目的基因。

产品优势：提取速度快，一步核酸提取，快速高效，核酸提取效率高；？操作简单，提供PCR反应体系预混液，直接加样检测，无需自行配制； ?特异性强，使用高特异性引物和探针，保证实验的准确性；灵敏度高，采用高效扩增酶，检测灵敏度可达10-100拷贝/检测。

产品构成：

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<乙>1。质量控制

1：实验室过程中，每批预富集液、选择性富集液、分离板等为空白对照。在检验过程中掌握检验环境是否有污染。
2：常规使用单核细胞增生李斯特菌ATCC菌株或等效的其他标准菌株，在P2实验室或阳性对照实验室，使用合适的食品样品进行阳性对照实验验证，污染剂量应控制在10-100CFU/25g并记录，每2个月至少进行一次验证实验。
3：每批培养基和生化试剂需与推荐的阳性、阴性对照标准菌进行验证，并做好记录。

二、难分析

Q1：在没有典型菌落的情况下，为什么要选择非典型菌落进行鉴定？
根据经验，有少数单核细胞增生李斯特菌在李斯特菌显色平板上显示非典型菌落。

Q2：为什么在PALCAM选择性平板上鉴定出典型菌落后，非单核细胞增生李斯特菌的概率较高？
PALCAM 是李斯特菌的选择性培养板。根据经验，环境中的无害李斯特菌较多。因此，应结合显色板挑出较典型的菌落进行鉴定。

Q3：3次或以上连续稀释结果均为阳性时，如何选择？
选择原则参照细菌学分析手册附录2：最可能数形式连续稀释。

Q4：预富集或选择性富集结束后，如果肉汤中没有微生物生长，是否可以终止实验？不能，因为肉眼可见的细菌浓度是107 CFU/mL，低于这个浓度肉眼是检测不到的。

文章来源：《临床检验杂志》 网址: http://www.lcjyzzzz.cn/zonghexinwen/2021/0818/679.html